實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人熱休克蛋白70（HSP-70）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人熱休克蛋白70（HSP-70）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)

準(zhǔn)品100µl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50µl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100µl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50µl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl棄掉，再各取50µl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50µl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50µl，混勻后從第七、第八孔中分別取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50µl，混勻后從第九第十孔中各取50µl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50µl，濃度分別為12ng/ml，8ng/ml，4ng/ml，2ng/ml，1ng/ml）。