1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/L，15 ng/L)。

2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置38℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物請避光保存。

7． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9． 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

特異性：Hu IL-1a，檢測范圍：3.9pg/ml~250pg/ml，靈敏度：2pg/ml，標(biāo)本用量：100ul/well。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法的原理制備，適用于體外定量檢測人血清、血漿、組織、體液或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的天然和重組的IL-1a濃度。白介素-1（IL-1）是IL-1α和IL-1β兩種蛋白的統(tǒng)稱，是由不同基因編碼的，但它們識別細(xì)胞表面相同的受體。IL-1α和IL-1β結(jié)構(gòu)相似，在氨基酸水平上有25%的同源性；兩種都是由分子量31kDa前體裂解成17.5kDa的蛋白質(zhì)。IL-1α和IL-1β都不包含典型的疏水信號肽，但是有證據(jù)證明一些非典型路徑可以分泌這些因子。大量的IL-1α以前體形式保留在胞內(nèi)。一部分未修飾的IL-1α運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞表面但仍與細(xì)胞相連。未修飾的膜結(jié)合IL-1α體現(xiàn)生物活性，鄰近的細(xì)胞旁分泌IL-1。IL-1α和IL-1β與特定的受體結(jié)合后發(fā)揮其作用。

特異性：Human IL-2，檢測范圍：7.8pg/ml~500pg/ml，高靈敏度：4pg/ml，高特異性：不與IL-1,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF,VEGF,TGF及ICAM等反應(yīng)，高重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<10%，標(biāo)本用量：100ul/well。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法，適用于體外定量檢測人血清、血漿、組織或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中天然和重組的IL-2濃度。白介素2(IL-2)主要由絲裂原或抗原激活的T淋巴細(xì)胞表達(dá)的。它在促進(jìn)抗原特異性增殖的T細(xì)胞克隆增殖中起重要作用。另外，IL-2也參與其他不同種類細(xì)胞的多個(gè)免疫反應(yīng)。IL-2刺激胸腺細(xì)胞增殖；刺激激活的B細(xì)胞增殖與分化；促進(jìn)單核細(xì)胞的生長、分化與細(xì)胞殺傷能力；誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞的生長與刺激這些細(xì)胞的細(xì)胞因子表達(dá)以及細(xì)胞殺傷能力；增加淋巴激活殺傷細(xì)胞(LAK)的產(chǎn)生；誘導(dǎo)少突膠質(zhì)細(xì)胞的增殖與分化。人IL-2的cDNA編碼153個(gè)氨基酸糖蛋白前體包含20個(gè)氨基酸組成的信號肽，成熟時(shí)信號肽被剪切掉。在氨基酸水平序列上，小鼠IL-2與人IL-2的序列同源性達(dá)60%。人IL-2可以在小鼠細(xì)胞中活化，但是小鼠IL-2不能在人細(xì)胞中活化。IL-2基因定位在染色體4q位點(diǎn)。

特異性：Hu IL-2sRa，檢測范圍：62.5pg/ml~4000pg/ml，靈敏度：30pg/ml，標(biāo)本用量：100ul/well。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法的原理制備，適用于體外定量檢測人血清、血漿、組織、體液或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的天然和重組的IL-2sRa濃度。白介素2（IL-2）是通過結(jié)合多分子細(xì)胞受體復(fù)合物發(fā)揮生物活力的。多年來，這個(gè)受體復(fù)合物被認(rèn)為是由IL-2Rα與IL-2β兩個(gè)糖蛋白鏈組成的，兩個(gè)亞基相互結(jié)合在一起形成一個(gè)高親和力受體來傳遞IL-2信號的。IL-2Rα（也稱為Tac抗原或CD25），是一個(gè)分子量為55kD跨膜糖蛋白，有351個(gè)氨基酸組成。IL-2β在1989年被克隆出來，它是個(gè)由575個(gè)氨基酸組成的跨膜糖蛋白，分子量為75kD，其中有286個(gè)氨基酸位于胞漿內(nèi)，更顯著地參與了細(xì)胞信號傳導(dǎo)作用。常認(rèn)為它是IL-2一種弱抑制劑。在任何情況下，體液中增高的可溶性IL-2Rα常伴隨這T細(xì)胞與B細(xì)胞的增加與免疫系統(tǒng)的激活。